紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的用途及波長(zhǎng)校正分析
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同，因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。紫外可見(jiàn)分光光度法的定量分析基礎(chǔ)是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。朗伯定律是說(shuō)明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說(shuō)明光的吸收與溶液濃度成正比;如果同時(shí)考慮吸收層厚度和溶液濃度對(duì)光吸收率的影響，即朗伯-比耳定律。
一、用途主要?dú)w納為以下幾點(diǎn)
1、鑒定物質(zhì)。用來(lái)測(cè)量待測(cè)物質(zhì)對(duì)可見(jiàn)光的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器，稱(chēng)為可見(jiàn)分光光度計(jì);紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)用來(lái)測(cè)量待測(cè)物質(zhì)對(duì)可見(jiàn)光或紫外光(200~760nm)的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器。可以測(cè)定核酸和蛋白的濃度，也可以測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度。
2、待測(cè)物質(zhì)是標(biāo)準(zhǔn)物及標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照進(jìn)行分析。
3、比較z大吸收波長(zhǎng)吸收系數(shù)的一致性。
4、物質(zhì)的純度檢驗(yàn)。
5、推測(cè)化合物的分子結(jié)構(gòu)及構(gòu)成。
6、是判定絡(luò)合物的組成及穩(wěn)定常數(shù)的測(cè)定。
二、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的波長(zhǎng)怎樣校正。
1．調(diào)整
?。?） 在接通電源前，應(yīng)對(duì)儀器的安全性進(jìn)行檢查，電源線接線應(yīng)牢固，接地線通地要良好，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再接通電源。
（2） 將靈敏度旋鈕調(diào)至“1”檔（放大倍率z?。?。調(diào)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器至所需波長(zhǎng)。
（3） 開(kāi)啟電源開(kāi)關(guān)，指示燈亮，選擇開(kāi)關(guān)置于“T”，調(diào)節(jié)透光率[100%T]旋鈕使數(shù)字顯示[100.0]左右，預(yù)熱20min .
根據(jù)溶液濃度大小，選擇液層厚度合適的吸收池。
2．校正
?。ǎ。┐蜷_(kāi)吸收池暗室蓋（光門(mén)自動(dòng)關(guān)閉），調(diào)節(jié)[0% T]旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”，蓋上吸收池蓋，將參比溶液置于光路，使光電管受光，調(diào)節(jié)透光率[100% T] 旋鈕，使數(shù)學(xué)顯示為“100.0”。
（2）如果顯示不到“100”，則可適當(dāng)增加電流放大器靈敏度檔數(shù)，但應(yīng)盡可能使用低檔數(shù)，這樣儀器將有更高的穩(wěn)定性。當(dāng)改變靈敏度 后必須重新校正“0”和“100”。
（3）按（1）連續(xù)幾次調(diào)整“00.0”和“100.0”后，如將選擇開(kāi)關(guān)置于“A”，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)零旋鈕，使數(shù)字顯示為“.000”，即可進(jìn)行下面吸光度A的測(cè)量；如將選擇開(kāi)關(guān)置于“C”，將標(biāo)準(zhǔn)溶液推入光路，調(diào)節(jié)濃度旋鈕，使得數(shù)字顯示值為已知標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度數(shù)值，即可進(jìn)行下面濃度c的測(cè)量。
3．測(cè)定
?。?)吸光度Ａ的測(cè)量。將要測(cè)Ａ的試樣溶液推入光路，顯示值即為待測(cè)樣品的吸光度值Ａ。
?。?)濃度c的測(cè)量。將要測(cè)c試樣溶液推入光路，即可讀出待測(cè)樣品的濃度值c。
4．結(jié)束
測(cè)量完畢，關(guān)閉電源，將各調(diào)節(jié)旋鈕恢復(fù)至初始位置。取出吸收池洗凈，晾干，存于專(zhuān)用盒內(nèi)。
5.注意事項(xiàng)：
?。?)使用前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和原理，以及各個(gè)旋鈕之功能。
?。?)儀器接地要良好，否則顯示數(shù)字不穩(wěn)定。
?。?)如果大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng)時(shí)，在調(diào)整“00.0”和“100”后稍等片刻（因光能量變化急劇，光電管受光后響應(yīng)緩慢，需一段光響應(yīng)平衡時(shí)間），當(dāng)穩(wěn)定后，重新調(diào)整“00.0”和“100”即可工作。
?。?)儀器左側(cè)下角有一只干燥劑筒，應(yīng)保持其干燥，發(fā)現(xiàn)干燥劑變色應(yīng)立即更新或烘干后再用。
?。?)當(dāng)儀器停止工作時(shí)，關(guān)掉電源，電源開(kāi)關(guān)需同時(shí)切斷，并罩好儀器。
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